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遗传性血小板无力症的发病机制及产前诊断
- 李建琴, 王兆钺, 胡绍燕, 赵小娟, 曹丽娟
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2016, 34(2):
132.
doi:10.3969 j.issn.1000-3606.2016.02.012
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摘要
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多维度评价
目的 探讨血小板无力症(GT)的基因测序与产前诊断。方法 采集1 例表型GT 患儿、父母及1 例正常对照者的静脉血,患儿母亲腹中孕23 周胎儿的脐带血和羊水,及其出生2 d 时的静脉血。检测患儿、患儿父母、胎儿脐血及正常对照者的血凝常规和血小板聚集试验;流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白(GP)IIb 和GPIIIa 的表达;微卫星技术确定胎儿脐血是否被母体细胞污染;PCR 技术扩增患儿及其父母,以及胎儿及出生2 d 静脉血GPIIb、GPIIIa 所有外显子以及外显子和内含子交界区, 扩增产物直接测序。结果 二磷酸腺苷(ADP)不能诱导患儿的血小板发生聚集,胎儿脐血中ADP 诱导的血小板最大聚集率约为正常人一半,患儿父母和胎儿出生2 d 的ADP 诱导的血小板最大聚集率与正常血小板聚集率相当。患儿血小板膜表面GPIIb、GPIIIa 的的平均荧光强度(MnX)分别约为正常对照的10% 及0,而患儿父母、胎儿脐血和胎儿出生2 d 的MnX 分别为正常对照的90% 以上和30% ~ 50%。羊水胎儿脱落细胞和脐血DNA 微卫星分析证实胎儿羊水、脐血未被母体细胞污染;基因分析结果显示,患儿GPIIIa 6 号外显子 A38293 → C 和9号外显子 G42186 → A 的杂合突变,导致GP Ⅲ aHis281 → Tyr 和Cys400 → Pro 氨基酸的杂合改变。这两个突变分别来源于父亲和母亲。羊水胎儿脱落细胞、脐血或出生2 d 静脉血中只有1 个GPIIIa9 号外显子 G42186 → A 的杂合突变。结论 GT 患儿GPIIIa 的基因为双重杂合突变;胎儿出生后确证为GP Ⅲ a 基因杂合突变。